Наборы реагентов TSA
TSA (Tyramide Signal Amplification), Тирамидная амплификация сигнала – это оригинальная технология для усиления сигнала. Реагенты TSA увеличивают чувствительность окрашивания маркеров от 10 до 100 раз и подходят для работы с широким спектром исследований.
Области применения:
- Иммуногистохимия (ИГХ)
- Иммуноцитохимия (ИЦХ)
- In situ гибридизация (ISH)
Стандартная флуоресцентная детекция основана на включении прямо меченых флуорохромом антител. Детекция TSA основана на включении в процесс пероксидазы хрена, которая активирует тирамидные остатки, связанные с флуорохромом. Множество активированных тирамидных остатков связываются с субстратом ковалентно в месте локализации фермента. Таким образом, с исследуемым антигеном вместо одной молекулы флуорохрома связываются в 10-100 раз больше, что и дает усиление сигнала.
Для усиления хромогенного окрашивания разработаны реагенты TSA, связанные с ферментом – пероксидазой хрена или щелочной фосфатазой. Вместо одной реакции, происходит в 10 – 100 раз больше реакций, задействуется большее количество субстрата, и это дает усиление сигнала.
Схема детекции с использованием TSA
B - биотин
SA - стрептавидин
DNP - динитрофенол
HRP – пероксидаза хрена
Стандартное включение флуоресцентной метки:
 | Включение флуоресцентной метки с использованием
технологии TSA (Tiramide Signal Amplification):
 |
Свойства | Преимущества |
- Реакция на основе пероксидазы хрена;
- Точная локализация сигнала;
- Возможность хромогенной или флуоресцентной детекции;
- Стабильное ковалентное связывание флуоресцентно
меченых молекул тирамида с тканью в месте локализации
молекул-мишеней. Включение стадий TSA в ИГХ,
ИЦХ и ISH исследование не требует значительных
изменений стандартного отработанного протокола;
- Работа с уже имеющимися в лаборатории реактивами.
|
- Увеличивает чувствительность от 10 до 100 раз;
- Высокое разрешение при низком фоновом окрашивании
(за счет уменьшения концентрации первичных антител
и уменьшения неспецифического связывания);
- Снижение расхода антител и себестоимости теста.
|
Пример 1. Препарат ткани легкого норки, детекция РНК р53
Стандартная ISH:
- РНК-зонд, меченый дигоксигенином (DIG)
- Антитела к дигоксигенину, конъюгированные с щелочной
фосфатазой (anti-DIG-AP)
- Хромогенная детекция BCIP/NBT
| ISH с использованием TSA
- РНК-зонд, меченый дигоксигенином (DIG)
- Антитела к дигоксигенину, конъюгированные
с пероксидазой хрена (anti-DIG-HRP)
- Амплификация сигнала тирамидом, конъюгированным
с щелочной фосфатазой (AP)
- Хромогенная детекция BCIP/NBT
|
 |  |
Пример 2. Определение вируса Эпштейна-Барра на препарате ткани лимфомы Ходжкина
Стандартная ИГХ:
- Антитела Anti-EBV, разведение 1:25
- Вторичные антитела, конъюгированные с флуорохромом
| ИГХ с использованием TSA
- Антитела Anti-EBV, разведение 1:25,000
- Вторичные антитела, конъюгированные
с пероксидазой хрена
- Амплификация сигнала тирамидом, конъюгированным
с флуорохромом
|
 |  |
Наборы реагентов TSA Plus для флуоресцентной детекции
Состав набора:
- сухой реагент на основе тирамида
- буфер для приготовления рабочего раствора
| Объем | Каталожный номер |
TSA Plus Fluorescein | 50-150 slides | NEL741001KT |
250-750 slides | NEL741B001KT |
25-75 slides | NEL741E001KT |
TSA Plus Tetramethylrhodamine | 50-150 slides | NEL742001KT |
250-750 slides | NEL742B001KT |
TSA Plus Cyanine 3 | 50-150 slides | NEL744001KT |
250-750 slides | NEL744B001KT |
25-75 slides | NEL744E001KT |
TSA Plus Cyanine 3.5 | 50-150 slides | NEL763001KT |
250-750 slides | NEL763B001KT |
25-75 slides | NEL763E001KT |
TSA Plus Cyanine 5 | 50-150 slides | NEL745001KT |
250-750 slides | NEL745B001KT |
25-75 slides | NEL745E001KT |
TSA Plus Cyanine 5.5 | 50-150 slides | NEL766001KT |
250-750 slides | NEL766B001KT |
25-75 slides | NEL766E001KT |
TSA Plus Cyanine 3 / Cyanine 5 | 50-150 slides | NEL752001KT |
TSA Plus Cyanine 3 / Fluorescein | 50-150 slides | NEL753001KT |
TSA Plus Cyanine 5 / Fluorescein | 50-150 slides | NEL754001KT |
TSA Plus Fluorescein / Tetramethylrhodamine | 50-150 slides | NEL756001KT |
TSA Plus Fluorescence Palette Kit | 10-35 slides | NEL760001KT |
TSA Biotin System | 200-600 slides | NEL700001KT |
TSA Biotin System | 50-150 slides | NEL700A001KT |
Наборы реагентов TSA Plus для хромогенной детекции
Состав набора:
- сухой реагент на основе тирамида
- буфер для приготовления рабочего раствора
| Объем | Каталожный номер |
TSA Plus DNP (AP) | 50-150 slides | NEL746A001KT |
TSA Plus DNP (AP) | 25-75 slides | NEL746B001KT |
TSA Plus DNP (HRP) | 50-150 slides | NEL747A001KT |
TSA Plus DNP (HRP) | 25-75 slides | NEL747B001KT |
Сопутствующие реагенты
| Объем | Каталожный номер |
AR6 Buffer | 250 mL | AR600250ML |
4 x 250 mL | AR6001KT |
AR9 Buffer | 250 mL | AR900250ML |
4 x 250 mL | AR9001KT |
Antibody Diluent, 1X | 100 mL | ARD1001EA |
50 mL | ARD1A01EA |
Opal Polymer HRP Ms + Rb, 1X | 50 mL | ARH1001EA |
25 mL | ARH1A01EA |
BLOCKING REAGENT | 10 GM | FP1012 |
3GM | FP1020 |
Antifluorescein-AP | 2x 275 µL | NEF709001PK |
Antifluorescein-HRP | 2x 275 µL | NEF710001EA |
ANTI-HUMAN IgG HRP-LABELED (GOAT) | 1mg at 1mg/mL | NEF802001EA |
ANTI-HUMAN IgG BIOTIN-LABELED (GOAT) | 0.5mg Lyophilized | NEF803001EA |
ANTI-RABBIT IgG HRP-LABELED (GOAT) | 1mg at 1mg/mL | NEF812001EA |
ANTI-RABBIT IGG HRP Sample (GOAT) | 0.1mg lyophilized | NEF812E001EA |
ANTI-RABBIT IgG BIOTIN-LABELED (GOAT) | 0.5mg Lyophilized | NEF813001EA |
Anti-rabbit IgG (Goat) AP Labeled | 1.0 mL at 1.0 mg/mL | NEF814001EA |
ANTI-MOUSE IgG (GOAT), HRP-LAB ELED | 1mg at 1mg/mL | NEF822001EA |
ANTI-MOUSE IGG HRP Sample (GOAT) | 0.1mg lyophilized | NEF822E001EA |
ANTI-MOUSE IgG (GOAT), BIOTIN- LABELED | 0.5mg Lyophilized | NEF823001EA |
Anti-mouse IgG (Goat) AP Labeled | | NEF824001EA |
Anti-digoxigenin HRP | 0.5ml at 0.8 mg/ml | NEF832001EA |
Anti-digoxigenin biotin | | NEF833001EA |
Streptavidin Fluorescein | 1mg in 1mL | NEL720001EA |
Streptavidin Texas Red | 1mg in 1mL | NEL721001EA |
Streptavidin Coumarin | 1mg in 1mL | NEL722001EA |
Streptavidin-HRP | | NEL750001EA |
Streptavidin-AP | | NEL751001EA |
BCIP/NBT Substrate | 2 x 250 ml of RTU solution | NEL937001PK |
DAB Substrate | 10mL Concentrate | NEL938001EA |
Opal Slide Processing Jars | 4-pack | STJAR4 |
*RUO – только для научных исследований
Назад в раздел