Наборы реагентов TSA

Наборы реагентов TSA

TSA (Tyramide Signal Amplification), Тирамидная амплификация сигнала – это оригинальная технология для усиления сигнала. Реагенты TSA увеличивают чувствительность окрашивания маркеров от 10 до 100 раз и подходят для работы с широким спектром исследований.

Области применения:

• Иммуногистохимия (ИГХ)
• Иммуноцитохимия (ИЦХ)
• In situ гибридизация (ISH)

Стандартная флуоресцентная детекция основана на включении прямо меченых флуорохромом антител. Детекция TSA основана на включении в процесс пероксидазы хрена, которая активирует тирамидные остатки, связанные с флуорохромом. Множество активированных тирамидных остатков связываются с субстратом ковалентно в месте локализации фермента. Таким образом, с исследуемым антигеном вместо одной молекулы флуорохрома связываются в 10-100 раз больше, что и дает усиление сигнала.

Для усиления хромогенного окрашивания разработаны реагенты TSA, связанные с ферментом – пероксидазой хрена или щелочной фосфатазой. Вместо одной реакции, происходит в 10 – 100 раз больше реакций, задействуется большее количество субстрата, и это дает усиление сигнала.

Схема детекции с использованием TSA



B - биотин
SA - стрептавидин
DNP - динитрофенол
HRP – пероксидаза хрена

Стандартное включение флуоресцентной метки:	Включение флуоресцентной метки с использованием технологии TSA (Tiramide Signal Amplification):
Свойства	Преимущества
Реакция на основе пероксидазы хрена; Точная локализация сигнала; Возможность хромогенной или флуоресцентной детекции; Стабильное ковалентное связывание флуоресцентно меченых молекул тирамида с тканью в месте локализации молекул-мишеней. Включение стадий TSA в ИГХ, ИЦХ и ISH исследование не требует значительных изменений стандартного отработанного протокола; Работа с уже имеющимися в лаборатории реактивами.	Увеличивает чувствительность от 10 до 100 раз; Высокое разрешение при низком фоновом окрашивании (за счет уменьшения концентрации первичных антител и уменьшения неспецифического связывания); Снижение расхода антител и себестоимости теста.

Пример 1. Препарат ткани легкого норки, детекция РНК р53

Стандартная ISH: РНК-зонд, меченый дигоксигенином (DIG) Антитела к дигоксигенину, конъюгированные с щелочной фосфатазой (anti-DIG-AP) Хромогенная детекция BCIP/NBT	ISH с использованием TSA РНК-зонд, меченый дигоксигенином (DIG) Антитела к дигоксигенину, конъюгированные с пероксидазой хрена (anti-DIG-HRP) Амплификация сигнала тирамидом, конъюгированным с щелочной фосфатазой (AP) Хромогенная детекция BCIP/NBT

Пример 2. Определение вируса Эпштейна-Барра на препарате ткани лимфомы Ходжкина

Стандартная ИГХ: Антитела Anti-EBV, разведение 1:25 Вторичные антитела, конъюгированные с флуорохромом	ИГХ с использованием TSA Антитела Anti-EBV, разведение 1:25,000 Вторичные антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена Амплификация сигнала тирамидом, конъюгированным с флуорохромом

*RUO – только для научных исследований


Назад в раздел