Флуоресцентное окрашивание является одним из наиболее используемых способов выявления результатов биоанализа и синтеза. Реактивность красителей, их химическая устойчивость, фотостабильность и высокий квантовый выход флуоресценции делают их наиболее подходящими маркерами для анализа олигонуклеотидов, белков и других биомолекул.
Производитель BioActs предлагает широкий выбор флуорохромов в ближнем ИК-спектре, что является оптимальным решением для коньюгирования с биомолекулами, т.к. биоматериалы в диапазоне длин волн 600-1200 нм имеют низкую собственную флуоресценцию, что исключает наличие фонового сигнала при анализе и, следовательно, увеличивает чувствительность регистрации флуоресцентного маркера.
Реакционноспособные красители – группа реагентов, связанная с флуорохромом определенной длинны волны, способная формировать устойчивые связи с биомолекулами, т.к. нуклеиновые кислоты, олигонуклеотиды, пептиды, белки, а также антителами. Останавливая свой выбор на красителях, стоит обратить внимание на их физико-химические свойства реагента: рабочую pH и их растворимость.
FSD Fluor™ NHS/Flamma® NHS ester или сукцинимидиловый эфир -свободно связывается с аминами благодаря прочной амидной связи. NHS имеет сродство к алифатическим аминам (например, фрагментам лизина), между тем хуже реагирует с ароматическими аминами, спиртами, фенолами и гистидином. Однако, есть особенности условий pH среды, которые позволяют селективно конъюгировать реагент: при pH ~7 сложный эфир активнее связывается с N-концевым остатком пептидов, при pH 8,5-9,5 быстрее взаимодействует с ε-аминогруппой лизина. При выборе красителя также стоит обратить внимание, что NHS является гидрофобной молекулой и требует органического растворителя, такого как DMSO или DMF
Артикул /
Наименование
Наименование
Возбуждение/эмиссия
Производитель
Фасовка
Запрос
Flamma® Sulfo-NHS ester – модифицированный вариант красителя для связывания красителя с ε-аминогруппами лизина или аминоконцом нуклеотидов в водных растворителях.
Артикул /
Наименование
Наименование
Возбуждение/эмиссия
Производитель
Фасовка
Запрос
Flamma® Fluors Vinylsulfone представляет собой нечувствительную к pH и высокой температуре реактивную форму красителя, которая используется для формирования стабильного сигнала флуоресценции при биовизуализации аминокислот. Винилсульфоны легко реагируют с первичными аминами олигонуклеотидов или белков, образуя устойчивую аминосвязь между красителем и биомолекулой.
Артикул /
Наименование
Наименование
Возбуждение/эмиссия
Производитель
Фасовка
Запрос
Flamma® Fluors Hydrazide – гидразидный краситель, способен участвовать в реакции восстановительного аминирования с альдегидом и кетоном с образованием иминной связи между молекулами. Основной целью гидразида для анализа являются свободные редуцирующие сахара, которые легко окисляются до кетонов и альдегидов.
Артикул /
Наименование
Наименование
Возбуждение/эмиссия
Производитель
Фасовка
Запрос
Flamma® Fluors dichlorotriazine – предназначен для захвата гидроксильных групп. Остаток гидроксила замещает хлор в триазиновом кольце, образуя при этом арильную эфирную связь. Особенность дихлортриазинового красителя заключается в том, что он можем напрямую реагировать с полисахаридами и другими спиртами в водном растворе в условиях pH > 9.
Артикул /
Наименование
Наименование
Возбуждение/эмиссия
Производитель
Фасовка
Запрос
Функциональные красители – это группа нереакционноспособных реагентов, связанных с флуорохромом. Используемых в качестве эталонного стандарта для экспериментов с коньюгатами той же флуоресцентной метки. В отдельных случаях могут быть преобразованы в активную форму.
Flamma ® Fluors Carboxylic acid – нективная форма флуоресцентного красителя, которая может быть использована в качестве эталонного стандарта для связанных с биомолекулой красителей. Тем не менее карбоновая кислота может быть преобразована в реактивную форму амина или связана с гидразинами посредствам стандартных химических методов.
Артикул /
Наименование
Наименование
Возбуждение/эмиссия
Производитель
Фасовка
Запрос
Flamma® Fluors Amine – функциональный краситель, который представляет собой флуорохром, связанный с первичным амином через «спейсер». Используется в качестве эталонного стандарта для коньюгатов красителей. Может связываться с карбоновыми кислотами небольших молекул или амидной связью с биомолекулами.
Артикул /
Наименование
Наименование
Возбуждение/эмиссия
Производитель
Фасовка
Запрос
Flamma® Fluors Thiol – функциональный краситель, коньюгат флуорохрома и первичной тиоловой группы, соединенный «спейсером». Данный краситель может взаимодействовать с биомолекулой через дисульфидную связь между тиоловой группой и остатком цистеина.
Артикул /
Наименование
Наименование
Возбуждение/эмиссия
Производитель
Фасовка
Запрос
Гасители флуоресценции – вещества, способные поглощать флуоресцентный сигнал от соседней молекулы флуорохрома, рассеивая при этом энергию в ближнем инфракрасном электромагнитном спектре. Принцип их совместной работы состоит в том, что молекула флуорохрома и гасителя в свободном состоянии, или непосредственно конъюгированном, активно взаимодействуют друг с другом, однако при отдалении друг от друга (например, амплификации) молекулы теряют контакт и поглощения энергии не происходит. В этом случае будет фиксироваться флуоресцентный сигнал. Подобный тип взаимодействия широко применим при ПЦР, синтезе олигонуклеотидов, создании FRET-зондов, анализа активности протеаз и др.
Гаситель флуоресценции qBlack Flamma способен поглощать флуоресценцию большинства популярных флуорохромов с длинной волны эмиссии от 400 до 800 нм. Данная группа реагентов представлена различными коньюгатами в составе реакционноспособных групп и неактивными форм.
Гасители qFlamma® Black01 в составе с реакционноспособными группами:
Артикул /
Наименование
Наименование
Реакционноспособные красители
Целевая группа
Фасовка
Запрос
Гасители qFlamma® Black01 в составе с функциональными неактивными группами:
Артикул /
Наименование
Наименование
Функциональные красители
Целевая группа
Фасовка
Запрос
Различные производители флуорохромов предлагают широкий ассортимент красителей, которые могут отличаться спектральными свойствами, яркостью и квантовым выходом, фотостабильностью, а также растворимостью и способностью связываться с целевыми мишенями. Большой выбор флуорохромов позволяет подбирать оптимальные флуоресцентные красители в зависимости от возможностей оборудования, особенностей образца и целей исследования.
BioActs Flamma® Fluors — группа флуоресцентных красителей, включающая широкий список реагентов с различными реактивными и функциональными группами. Спектр эмиссии представлен цветами от УФ до ближнего ИК. Отличительной особенностью данного флуорохрома является высокая фотостабильность и устойчивость флуоресценции после конъюгации с биомолекулами.
BioActs FSD Fluor™ — серия красителей нового поколения, характеризующиеся отличной интенсивностью флуоресценции и высоким квантовым выходом по сравнению с аналогичными красителями. Флуорохромы серии FSD Fluor™ охватывают широкий спектр цветов: от зеленого до ближнего ИК, что дает возможность их применения в различных областях биологических исследований, в том числе in vivo.
Таблица сравнения флуорохромов
Производитель
Флуорохром
Возбуждение/эмиссия
Аналог
BioActs
Flamma® 380
380/450 нм
Cascade Blue
Alexa 405
BV™ 421
Servicebio
iF®440
434/480 нм
Cascade Blue
BFP
CFP
AmCyan
BioActs
BioActs
BioActs
Servicebio
Servicebio
BioActs
BioActs
Flamma® 496
Flamma® 488
FSD Fluor™ 488
iF®488
iF®488
Flamma® 552
Flamma® 552
496/516 нм
495/519 нм
496/519 нм
468/493 нм
541/557 нм
537/560 нм
549/564 нм
Alexa488
FITC
Cy2
FAM
Rhodamine 110
GFP
BV™ 510
BioActs
Servicebio
BioActs
BioActs
FSD Fluor™ 555
iF555-Тирамид
Flamma® 581
FSD Fluor™ 594
560/589 нм
557/570 нм
554/567 нм
581/596 нм
Alexa555
Cy3
TAMRA
Rhodamine
TRITC
DsRed
Servicebio
BioActs
BioActs
iF594-Тирамид
Flamma® 648
FSD Fluor™ 647
588/604 нм
593/618 нм
648/663 нм
Alexa594
iF594
mCherry
Texas Red
mRFP
Servicebio
BioActs
BioActs
iF647-Тирамид
Flamma® 675
FSD Fluor™ 680
656/670
651/667 нм
683/694 нм
Alexa647
Cy5
BioActs
Servicebio
BioActs
Flamma® 749
iF700-Тирамид
FSD Fluor™ 750
680/695 нм
690/713 нм
749/774 нм
Alexa680
Cy5.5
BioActs
Servicebio
Flamma® 774
iF750
752/773 нм
757/779 нм
Alexa750
Cy7
BioActs
BioActs
FSD Fluor™ 800
Flamma® 800
774/791 нм
793/810 нм
Alexa790
Cy7.5
ICG