Система для клеточного сортинга BD FACSAria™III

Описание

Цитофлуориметр сортер клеток BD FACSAria™ III предназначен для высокопроизводительного сортинга на основе многоцветной проточной цитометрии. Эта система сочетает в себе новейший оригинальный технический дизайн с простым программным обеспечением. Прибор не требует при установке подключения внешних устройств регулировки давления и систем водяного охлаждения, что делает возможным его использование в любой лаборатории. Благодаря запатентованной конструкции оптической и проточной систем, а также автоматизации процессов настройки системы, прибор обеспечивает экспертный уровень анализа и сортировки для различных приложений проточной цитометрии.

Оптика

Лазеры

Твердотельные лазеры 355 нм (>15 мВт), 405 нм (>50 мВт), 488 нм (>20 мВт), 561 нм (>50 мВт) и 633 нм (>18 мВт)

Регистрируемые параметры

До 18 флуоресцентных параметров, до 20 оптических параметров

Чувствительность регистрации флуоресценции, MESF

<85 эквивалентов FITC, <29 эквивалентов PE

Форма лазерного луча

9 × 65-мкм

Собирающая линза

1.2 NА, соединена с проточной кюветой оптическим гелем

Детекторы светорассеяния

Детектор FSC: фотодиод, 488/10 BP

Детектор SSC: фотоэлектронный умножитель (ФЭУ), 488/10 BP

Оптические фильтры

Синий (488 нм) лазер в отсутствие жёлто-зелёного (561 нм): 530/30, 585/42, 616/23, 695/40 либо 675/20, 760/60

Синий (488 нм) лазер при установленном жёлто-зелёном (561 нм): 530/30, 695/40 либо 675/20

Красный (640 нм) лазер: 670/30 нм, 780/60

Фиолетовый (405 нм) лазер: 450/40, 525/50, 610/20

Ультрафиолетовый (355 нм) лазер: 450/20, 670 LP

Жёлто-зелёный (561 нм) лазер: 581/15, 610/20, 670/14 нм, 780/60

Флуорохромы для синего лазера

В отсутствие жёлто-зелёного лазера: FITC, Alexa Fluor® 488, PE, PE-Texas Red®, Propidium iodide (PI), PerCP-Cy™5.5, PI, PerCP, PE-Cy™7

При установленном жёлто-зелёном лазере: FITC, PerCP-Cy5.5, PI, PerCP

Скорость регистрации событий

APC, Alexa Fluor® 647, APC-Cy7, APC-H7

Флуорохромы для фиолетового лазера

BV421, V450, VPD450, Pacific Blue™, DAPI, BV510, V500, AmCyan, BV605

Флуорохромы для ультрафиолетового лазера

Hoechst Blue, DAPI, Hoechst Red

Флуорохромы для жёлто-зелёного лазера

PE, DsRed, PE-Texas Red®, mCherry, PI, PE-Cy™5 либо 710/50-nm PE-Cy5.5, PE-Cy7

Сортировка клеток

Размер ноззла

70 мкм, 85 мкм, 100 мкм, 130 мкм

Частота генерации капли

1–100 000 Гц

Режимы сортировки

2-way, 4-way, Single cell sorting

Емкости для сортировки

Предметные стёкла для микроскопии

6-,24-, 96-, 384-луночные планшеты

Пробирки 5, 1,5 и 15 мл

Температурный контроль емкости для забора образца

4ºC, 20ºC, 37ºC и 42ºC

Проточная система

Скорость регистрации событий

До 70 000 событий в секунду

Скорость подачи образца

10-80 мкл/мин

Пробирки для подачи образца

Микропробирки, пробирки 12 x 75 мм и 15 мл, из полистирола или полипропилена

Минимальный размер детектируемых частиц

0.5 мкм

Контейнеры для жидкостей

Автоклавируемый контейнер для проточной жидкости (10 л)

Контейнер для отработанного раствора (10 л)

Контейнер для обеззараживающего раствора (5 л)

Анализ данных

Рабочая станция

HP Z2 Mini G4, на базе процессора Intel Core i7 8700

Автоматизированные процессы

Автоматизированное включение и выключение

Очистка проточной кюветы

Подготовка к асептической сортировке

BD FACS™ Accudrop определение задержки падения капли

Sweet Spot - обнаружения засорения и сортировки трубок

Программное обеспечение

BD FACSDiva™ v8.0 или позже

Разрешение рабочей станции

262144 канала

Операционная система станции

Windows 10 Professional, 64 bit

Размещение прибора

Габариты

Сортер ВхШхГ : 71 × 122 × 71 см, вес 181,4 кг

Мобильная стойка для контейнеров с жидкостями (без контейнеров) ВхШхГ: 66 × 81 × 66 см, вес 81,7 кг

Источник бесперебойного питания

3000 VA

Система температурного контроля

Регулировка температурного режима отсортированных фракций

Оптические фильтры для полимерных коньюгатов BD Horizon Brilliant™

Расширение спектра используемых флуорохромов

Оставить запрос

Оптика

Проточная система

Анализ данных

Опции

Ресурсы

ОПТИКА ВОЗБУЖДЕНИЯ

Возможность установки до шести лазеров.
Лучи лазеров пространственно разделены для обеспечения многоцветности анализа.
Возможность выбора длин волн и мощностей лазеров, исходя из научных задач лаборатории.
Оптоволоконная доставка лазерных лучей до фокусирующих призм для минимальной потери интенсивности света.
Воспроизводимость результатов и отсутствие необходимости ежедневной юстировки прибора обеспечены фиксацией всех элементов оптической системы.

ОПТИКА РЕГИСТРАЦИИ СИГНАЛА

Кварцевая кювета и светособирающая линза соединены оптическим гелем, исключающим потерю флуоресцентного сигнала.
Независимые запатентованные системы регистрации сигнала BD™ Octagon и BD™ Trigon для каждого лазера позволяют свободно комбинировать различные флуоресцентные метки в многоцветных исследованиях.
Круговое расположение детекторов для регистрации и разделения сигнала от каждого лазера для максимально эффективной детекции сигнала.
Возможность замены оптических фильтров оператором.

Форма луча лазера

9 × 65-мкм

Регистрируемые
параметры

До 18 флуоресцентных параметров,
до 20 оптических параметров.

Чувствительность
регистрации
флуоресценции

< 85 эквивалентов FITC
< 29 эквивалентов PE

Скорость регистрации событий

До 70 000 событий в секунду

Минимальный размер частиц

0,5 мкм

КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА

Автоматизированы протоколы запуска прибора, его выключения, а также ежедневная калибровка (check performance), осуществляемая программным модулем Cytometer Setup and Tracking™ (CS&T™) .
Автоматический расчет компенсационной матрицы.
Отслеживание всех характеристик работы сортировщика и автоматическая генерация графиков Леви-Дженнингса, отображающих изменение состояния прибора во времени.
Процедура контроля качества гарантирует воспроизводимые экспериментальные результаты и стабильную работу прибора с течением времени.

ВЫСОКОСКОРОСТНАЯ СОРТИРОВКА

Скорость сортировки – 70 000 событий в секунду.
Частота формирования капель 100 кHz.
4-way сортинг при сортировке в пробирки 5 мл.
Многоразовые заменяемые ноззлы различных размеров. Фиксированное положение ноззлов обеспечивает стабильность потока.
Возможность анализа индивидуального фенотипа каждой клетки в режиме Single cell sorting.
Поддержание жизнеспособности биоматериала, благодаря термостатированию образцов и отсортированных фракций при комфортных температурах.
Модуль BD ACDU™ (Automated Cell Deposition Unit) позволяет прозводить сортировку в различные емкости для сбора фракций (планшеты, чашки Петри, предметные стёкла, многолуночные камеры на основе предметных стекол).

АВТОМАТИЗАЦИЯ ПРОЦЕССОВ

Автоматизированная настройка параметра Drop Delay, характеризующего временной интервал между регистрацией оптических сигналов от клетки и формированием содержащей её капли.
Автоматическое поддержание стабильности потока благодаря технологии Sweet Spot.
Настройки давления и частоты для используемого ноззла подбираются программой, что позволяет не проводить перенастройку оптики и проточной системы при замене ноззла.
Изоляция ёмкостей для сортировки специальным аспирационным механизмом в случае обнаружения засора в системе для предотвращения контаминации отсортированных фракций.
Автоматическая подготовка системы к асептической сортировке.

Пробирки для забора образца

Микропробирки

Пробирки 5 мл, 12 x 75 мм из полистирола или полипропилена

Пробирки 15 мл из полистирола или полипропилена

Система подачи образца

Функция контроля температурного режима (4 °C, 20 °C, 37 °C, 42 °C)

Функция перемешивания образца при заборе

Автоматическая остановка подачи образца при опустошении пробирки

Температурный контроль отсортированных фракций (опция)

Позволяет поддерживать любую температуру для создания оптимальных условий.

Ноззл

70 мкм

85 мкм

100 мкм

130 мкм

Минимальный размер детектируемых частиц

0.5 мкм

Режимы сортировки

2-way : 12 x 75-мм пробирки и пробирки на 15-мл

4-way : 1.5 мл микропробирки и пробирки 12 x 75-мм

Single cell sorting: 6-, 24-, 96- и 384-луночные планшеты, предметные стёкла для микроскопии

ПРОТОЧНАЯ СИСТЕМА

Возможность полной замены линии подачи образца (Sample line).
Отдельная мобильная стойка для размещения емкостей с обслуживающими растворами.
Датчики уровня жидкостей в контейнерах облегчают планирование и проведение экспериментов.
Два дополнительных контейнера для обеззараживающего раствора могут быть использованы во время автоматического режима подготовки к асептической сортировке и при выключении прибора.
Возможность автоклавирования контейнера для проточной жидкости.

Программное обеспечение BD FACSDiva™ позволяет эффективно управлять сбором, анализом данных и процессом сортировки.
Создание шаблонов для конкретных приложений обеспечивает быстрое и последовательное выполнение рутинных экспериментов.
Для анализа полученных данных могут быть использованы различные виды графиков, автоматическая и ручная установка гейтов и их масштабирование на графиках, а также пакетный анализ и экспорт статистики в формате Excel.

Дифференцирующие клетки H9 анализировали с использованием набора BD Stemflow ™ Human Pluripotent Stem Cell Sorting and Analysis Kit. Этот набор содержит три меченых антитела, которые используются для идентификации как недифференцированных (TRA-1-81 и SSEA-3), так и дифференцированных (SSEA-1) плюрипотентных стволовых клеток. Эта комбинация маркеров широко используется для характеристики и выделения дифференцированных и недифференцированных стволовых клеток, полученных из hESCs и iPS-клеток.

Программное обеспечение

BD FACSDiva™ v9.0

Формат данных

FCS 3.0, FSC 3.1

Рабочая станция

HP Z2 Mini G4, на базе процессора Intel Core i7 8700

Операционная система станции

Windows 10 Professional, 64 bit

Разрешение рабочей станции

262144 канала

Обработка импульса от ФЭУ

Измерения высоты, площади, ширины и соотношения величин

АВТОМАТИЗАЦИЯ ЦИТОМЕТРИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Модуль Sample temperature control

Температурный контроль отсортированных фракций.
Состоит из водяной бани и специально разработанных держателей пробирок с емкостями для рециркуляции воды.
Рециркулирующая вода охлаждает или нагревает емкости для сбора отсортированных клеток.
Поддерживает сортировку в:

2-way (15 мл)
4-way (12 x 75 мм)
4-way (1,5 мл пробирки Eppendorf)

Модуль BD ™ Aerosol Management System

Откачивает воздух из камеры сбора образца.
Улавливает аэрозольные частицы во время сортировки.
Оснащен фильтром с размером пор 0,01 мкм.

Оптические фильтры для полимерных коньюгатов BD Horizon Brilliant™

Позволяют расширить спектр используемых флуорохромов.

Инструкции:

Оптическая схема проточного цитофлуориметра сортера клеток BD FACSAria™ III

Ресурсы:

Статьи:

1. Механизм цитотоксичности, вызванной цисплатином, коррелирует с нарушением метаболизма из-за выработки митохондриальных АФК.
Choi Y.M. et al. Mechanism of cisplatin-induced cytotoxicity is correlated to impaired metabolism due to mitochondrial ROS generation. PloS one, 10(8), 2015. doi: 10.1371/journal.pone.0135083.

2. Острый миелоидный лейкоз трансформирует нишу костного мозга в микроокружение, допускающее лейкоз, посредством секреции экзосом.
Kumar, B et al. Acute myeloid leukemia transforms the bone marrow niche into a leukemia-permissive microenvironment through exosome secretion. Leukemia, 32(3), 2018. doi: 10.1038/leu.2017.259.

3. Гетерогенные популяции атипичных клеток присутствуют в крови пациентов с метастатическим раком груди.
Lustberg, M.B. et al. Heterogeneous atypical cell populations are present in blood of metastatic breast cancer patients. Breast Cancer Research, 16(2), 2014. doi: 10.1186/bcr3622.

4. CD57 + CD4 Т-клетки лежат в основе отторжения аллотрансплантата, устойчивого к белатасепту.
Espinosa, J. et al. CD 57+ CD 4 T Cells Underlie Belatacept‐Resistant Allograft Rejection. American Journal of Transplantation, 16(4), 2016. doi: 10.1111/ajt.13613.

5. Дендритные клетки жировой ткани являются независимыми участниками воспаления, вызванного ожирением, и резистентности к инсулину.
Cho, K.W. et al. Adipose tissue dendritic cells are independent contributors to obesity-induced inflammation and insulin resistance. The Journal of Immunology, 197(9), 2016. doi: 10.4049/jimmunol.1600820.

6. Повышенная способность к супрессии инфильтрирующих опухоль миелоидных супрессорных клеток по сравнению с их периферическими аналогами.
Maenhout, S.K.et al. Enhanced suppressive capacity of tumor‐infiltrating myeloid‐derived suppressor cells compared with their peripheral counterparts.International journal of cancer, 134(5), 2014. doi: 10.1002/ijc.28449.

7. Альвеолярные макрофаги, происходящие из моноцитов, вызывают фиброз легких и сохраняются в легких на протяжении всей жизни.
Misharin, A.V. et al. Monocyte-derived alveolar macrophages drive lung fibrosis and persist in the lung over the life span. Journal of Experimental Medicine, 214(8), 2017. doi: 10.1084/jem.20162152.

8. Повышенная продукция IgG4 фолликулярными Т-хелперами 2 и участие фолликулярных Т-хелперов 1 в патогенезе заболеваний, связанных с IgG4.
Akiyama, M. et al. Enhanced IgG4 production by follicular helper 2 T cells and the involvement of follicular helper 1 T cells in the pathogenesis of IgG4-related disease. Arthritis research & therapy, 18(1), 2016. doi: 10.1186/s13075-016-1064-4.

9. Терапевтическое нацеливание антител на Notch1 в ксенотрансплантатах Т-острого лимфобластного лейкоза.
Agnusdei, V. et al. Therapeutic antibody targeting of Notch1 in T-acute lymphoblastic leukemia xenografts. Leukemia, 28(2), 2014. doi: 10.1038/leu.2013.183.