Проточный цитофлуориметр BD FACSAria™ Fusion

Описание

Цитофлуориметр-сортировщик BD FACSAria™ Fusion обеспечивает исключительную многоцветность в сочетании с простотой использования. Данный прибор сочетает современные технологии сортировки клеток и уникальные решения в области биобезопасности: при интеграции сортировщика в ламинарный бокс система отвечает самым строгим требованиям к защите оператора и образцов, а также мировым стандартам биозащиты. Благодаря запатентованной конструкции оптической и проточной систем, а также автоматизации процессов настройки системы прибор может применяться для широкого спектра исследований.

Оптика

Лазеры

Твердотельные лазеры 355 нм (>15 мВт), 405 нм (>85 мВт), 488 нм (>50 мВт), 561 нм (>50 мВт) и 640 нм (>100 мВт)

Регистрируемые параметры

До 18 флуоресцентных параметров, до 20 оптических параметров

Чувствительность регистрации флуоресценции, MESF

<87 эквивалентов FITC, <29 эквивалентов PE

Форма лазерного луча

9 × 65-мкм

Собирающая линза

1.2 NА, соединена с проточной кюветой оптическим гелем

Детекторы светорассеяния

Детектор FSC: фотодиод, 488/10 BP

Детектор SSC: фотоэлектронный умножитель (ФЭУ), 488/10 BP

Оптические фильтры

Синий (488 нм) лазер в отсутствие жёлто-зелёного (561 нм): 530/30, 585/42, 616/23, 695/40 либо 675/20, 760/60

Синий (488 нм) лазер при установленном жёлто-зелёном (561 нм): 530/30, 695/40 либо 675/20

Красный (640 нм) лазер: 670/30 нм, 780/60

Фиолетовый (405 нм) лазер: 450/40, 525/50, 610/20

Ультрафиолетовый (355 нм) лазер: 450/20, 670 LP

Жёлто-зелёный (561 нм) лазер: 581/15, 610/20, 670/14 нм, 780/60

Флуорохромы для синего лазера

В отсутствие жёлто-зелёного лазера: FITC, Alexa Fluor® 488, PE, PE-Texas Red®, Propidium iodide (PI), PerCP-Cy™5.5, PI, PerCP, PE-Cy™7

При установленном жёлто-зелёном лазере: FITC, PerCP-Cy5.5, PI, PerCP

Флуорохромы для красного лазера

APC, Alexa Fluor® 647, APC-Cy7, APC-H7

Флуорохромы для фиолетового лазера

BV421, V450, VPD450, Pacific Blue™, DAPI, BV510, V500, AmCyan, BV605

Флуорохромы для ультрафиолетового лазера

Hoechst Blue, DAPI, Hoechst Red

Флуорохромы для жёлто-зелёного лазера

PE, DsRed, PE-Texas Red®, mCherry, PI, PE-Cy™5 либо 710/50-nm PE-Cy5.5, PE-Cy7

Сортировка клеток

Размер ноззла

70 мкм, 85 мкм, 100 мкм, 130 мкм

Частота генерации капли

1–100 000 Гц

Режимы сортировки

2-way, 4-way, Single cell sorting

Емкости для сортировки

Предметные стёкла для микроскопии

6-,24-, 96-, 384-луночные планшеты

Пробирки 1,5 и 15 мл

Температурный контроль камеры забора образца

4ºC, 20ºC, 37ºC и 42ºC

Проточная система

Скорость регистрации событий

До 70 000 событий в секунду

Скорость подачи образца

10-80 мкл/мин

Пробирки для подачи образца

Микропробирки, пробирки 12 x 75 мм и 15 мл, из полистирола или полипропилена

Минимальный размер детектируемых частиц

0.5 мкм

Контейнеры для жидкостей

Автоклавируемый контейнер для проточной жидкости (10 л)

Контейнер для отработанного раствора (10 л)

Контейнер для обеззараживающего раствора (5 л)

Анализ данных

Рабочая станция

HP Z2 Mini G4, на базе процессора Intel Core i7 8700

Автоматизированные процессы

Автоматизированное включение и выключение

Очистка проточной кюветы

Подготовка к асептической сортировке

BD FACS™ Accudrop определение задержки падения капли

Sweet Spot - обнаружения засорения и сортировки трубок

Программное обеспечение

BD FACSDiva™ v8.0

Разрешение рабочей станции

262144 канала

Операционная система станции

Windows 10 Professional, 64 bit

Размещение прибора

Габариты

ВхШхГ : 142 × 128 × 87 см, вес 475 кг

С ламинарным боксом ВхШхГ: 220 × 127 × 89 см, вес 765 кг

Источник бесперебойного питания

3000 VA

Опция

Ламинарный бокс класса II типа A2

Защита оператора от частиц аэрозолей

Система температурного контроля

Регулировка температурного режима отсортированных фракций

Оптические фильтры для полимерных коньюгатов BD Horizon Brilliant™

Расширение спектра используемых флуорохромов

Оставить запрос

Оптика

Сортировка клеток

Анализ данных

Опции

Ресурсы

ОПТИКА ВОЗБУЖДЕНИЯ

Возможность установки до шести лазеров
Лучи лазеров пространственно разделены для обеспечения многоцветности анализа.
Возможность выбора длин волн и мощностей лазеров, исходя из научных задач лаборатории.
Оптоволоконная доставка лазерных лучей до фокусирующих призм для минимальной потери интенсивности света.
Воспроизводимость результатов и отсутствие необходимости ежедневной юстировки прибора обеспечены фиксацией всех элементов оптической системы.

СИСТЕМА РЕГИСТРАЦИИ СИГНАЛА

Кварцевая кювета и светособирающая линза соединены оптическим гелем, исключающим потерю флуоресцентного сигнала.
Независимые запатентованные системы регистрации сигнала BD™ Octagon и BD™ Trigon для каждого лазера позволяют свободно комбинировать различные флуоресцентные метки в многоцветных исследованиях.
Круговое расположение детекторов для регистрации и разделения сигнала от каждого лазера для максимально эффективной детекции сигнала.
Возможность регистрации FSC от лазера 405 нм для анализа микрочастиц (опция)

Форма луча лазера

9 × 65-мкм

Регистрируемые
параметры

до 18 флуоресцентных параметров,
до 20 оптических параметров.

Чувствительность
регистрации
флуоресценции

< 87 эквивалентов FITC
< 29 эквивалентов PE

Скорость регистрации событий

До 70 000 событий в секунду

Минимальный размер частиц

0,5 мкм

КОНТРОЛЬ

Автоматизированы протоколы запуска прибора, его выключения, а также ежедневная калибровка (check performance), осуществляемая программным модулем Cytometer Setup and Tracking™ (CS&T™) с использованием реагента BD CS&T beads.
Автоматическая настройка компенсационной матрицы.
Отслеживание всех характеристик работы сортировщика и автоматическая генерация графиков Леви-Дженнингса, отображающих изменение состояния прибора во времени.
Процедура контроля качества гарантирует воспроизводимые экспериментальные результаты и стабильную работу прибора с течением времени.

ВЫСОКОСКОРОСТНАЯ СОРТИРОВКА

Режим 4-way sorting для наиболее эффективной работы с образцами.
Сортировка клеток разного размера с использованием заменяемых ноззлов с разным диаметром.
Возможность анализа индивидуального фенотипа каждой клетки в режиме Single cell sorting.
Поддержание жизнеспособности биоматериала благодаря термостатированию образцов и отсортированных фракций при комфортных температурах.
Модуль BD ACDU™ (Automated Cell Deposition Unit) позволяет производить сортировку в различные емкости для сбора фракций (планшеты, чашки Петри, стёкла для микроскопии).

ОБЕСПЕЧЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ БЕЗОПАСНОСТИ

Закрытый путь от камеры для подачи образца к пробиркам для сортировки.
Встроенная система удаления аэрозолей.
Возможность подключения к лабораторной системе фильтрации и сушки воздуха для защиты от аэрозолей.
Программное управление ключевыми операциями сводит к минимуму прямое взаимодействие с сортировщиком.

АВТОМАТИЗАЦИЯ ПРОЦЕССОВ

Автоматизированная настройка параметра Drop Delay, характеризующего временной интервал между регистрацией оптических сигналов от клетки и формированием содержащей её капли.
Автоматическое поддержание стабильности потока благодаря технологии Sweet Spot.
Настройки давления и сортировки для используемого ноззла подбираются программой, что позволяет не проводить перенастройку оптики и проточной системы при замене нозла.
Изоляция ёмкостей для сортировки специальным аспирационным механизмом в случае обнаружения засора в системе для предотвращения контаминации отсортированных фракций.
Автоматическая подготовка системы к асептической сортировке.

Пробирки для забора образца

Микропробирки

Пробирки 12 x 75 мм из полистирола или полипропилена

Пробирки 15 мл из полистирола или полипропилена

Система подачи образца

Функция контроля температурного режима (4 °C, 20 °C, 37 °C, 42 °C)

Функция перемешивания образца при заборе

Автоматическая остановка подачи образца при опустошении пробирки

Температурный контроль отсортированных фракций (опция)

Позволяет поддерживать любую температуру для создания оптимальных условий.

Ноззл

70 мкм

85 мкм

100 мкм

130 мкм

Минимальный размер детектируемых частиц

0.5 мкм

Режимы сортировки

2-way : 12 x 75-мм пробирки и пробирки на 15-мл

4-way : 1.5 мл микропробирки и пробирки 12 x 75-мм

Single cell sorting: 6-, 24-, 96- и 384-луночные планшеты, предметные стёкла для микроскопии

ПРОТОЧНАЯ СИСТЕМА

Выдвижной отсек в основании системы обеспечивает лёгкий доступ к контейнерам с обслуживающими жидкостями.
Датчики уровня жидкостей в контейнерах облегчают планирование и проведение экспериментов.
Три дополнительных контейнера для обеззараживающего раствора могут быть использованы во время автоматического режима подготовки к асептической сортировке и при выключении прибора.
Возможность автоклавирования контейнера для проточной жидкости.

Программное обеспечение BD FACSDiva™ позволяет эффективно управлять сбором, анализом данных и процессом сортировки.
Создание шаблонов для конкретных приложений обеспечивает быстрое и последовательное выполнение рутинных экспериментов.
Для анализа полученных данных могут быть использованы различные виды графиков, автоматическая и ручная установка гейтов и их масштабирование на графиках, а также пакетный анализ и экспорт статистики в формате Excel.

10-цветная панель для анализа CD4 и CD8 эффекторных клеток и клеток памяти, а также регуляторных Т-клеток была использована для анализа на проточном цитометре BD FACSAria™ Fusion.

Программное обеспечение

BD FACSDivaTM v9.0

Формат данных

FCS 3.0, FSC 3.1

Рабочая станция

HP Z2 Mini G4, на базе процессора Intel Core i7 8700

Операционная система станции

Windows 10 Professional, 64 bit

Разрешение рабочей станции

262144 канала

Обработка импульса от ФЭУ

Измерения высоты, площади, ширины и соотношения величин

Ламинарный бокс

Тип А2, II класс биологической безопасности.
Надёжно защищает оператора при работе с биологически-опасными жидкостями.
Может быть заказан как вместе с сортировщиком, так и позже в качестве модернизации.
Бокс соответствует стандартам защиты персонала и продукции:

Международный стандарт 49 Национального фонда санитарии.
Европейский стандарт 12469.
Австралийский стандарт AS 2252.2-2009

Модуль Sample temperature control

Температурный контроль отсортированных фракций.
Состоит из водяной бани и специально разработанных держателей пробирок с емкостями для рециркуляции воды.
Рециркулирующая вода охлаждает или нагревает емкости для сбора отсортированных клеток.
Поддерживает сортировку:

2-way (15 мл).
4-way (12 x 75 мм).
4-way (1,5 мл пробирки Eppendorf).

Модуль BD ™ Aerosol Management System

Откачивает воздух из камеры сбора образца.
Улавливает аэрозольные частицы во время сортировки.
Оснащен фильтром с размером пор 0,01 мкм.

Оптические фильтры для полимерных коньюгатов BD Horizon Brilliant™

Позволяют расширить спектр используемых флуорохромов.

Инструкции:

Ресурсы:

Статьи:

1. Ассоциированные с возрастом В-клетки экспрессируют большой диапазон генов VH и Vk с соматическими гипермутациями.
Knode L.M.R. et al. Age-associated B cells express a diverse repertoire of VH and Vκ genes with somatic hypermutation. The Journal of Immunology, 198, 2017. doi: 10.4049/jimmunol.1601106

2. Сортировка с помощью проточной цитометрии для отделения жизнеспособных гигантских вирусов от совместно культивируемых амеб.
Khalil J.Y. et al. Flow cytometry sorting to separate viable giant viruses from amoeba co-culture supernatants. Frontiers in cellular and infection microbiology, 6, 2017. doi: 10.3389/fcimb.2016.00202

3. Энасидениб вызывает дифференцировку клеток острого миелоидного лейкоза, что способствует клиническому ответу.
Amatangelo M.D. et al. Enasidenib induces acute myeloid leukemia cell differentiation to promote clinical response. Blood, 130, 2017. doi: 10.1182/blood-2017-04-779447

4. Тераностические гибриды липосомы и наночастиц для доставки лекарств и биоимиджинга.
Seleci M. et al. Theranostic liposome–nanoparticle hybrids for drug delivery and bioimaging. International journal of molecular sciences, 18, 2017. doi: 10.3390/ijms18071415

5. Развитие альвеолярных макрофагов у мышей требует L-пластина для локализации клеток в альвеолах.
Todd E.M. et al. Alveolar macrophage development in mice requires L-plastin for cellular localization in alveoli. Blood, The Journal of the American Society of Hematology, 128, 2016.

6. Вариант Cas9, для эффективной генерации не содержащих индели своём в геноме плюрипотентных стволовых клеток со встроенными или измененными генами.
Howden S.E. et al. A Cas9 variant for efficient generation of indel-free knockin or gene-corrected human pluripotent stem cells. Stem cell reports, 7, 2016. doi: 0.1016/j.stemcr.2016.07.001

7. Runx3 программирует нахождение CD8 + T-клеток в нелимфоидных тканях и опухолях.
Milner J.J. et al. Runx3 programs CD8+ T cell residency in non-lymphoid tissues and tumours. Nature, 552, 2017. doi: 10.1038/nature24993

8. Жидкие ядерные конденсаты механически взаимодействуют с геномом и реструктурируют его.
Shin Y. et al. Liquid nuclear condensates mechanically sense and restructure the genome. Cell, 175, 2018. doi: 10.1016/j.cell.2018.10.057

9. Транскриптомные и морфофизиологические данные о специализированном типе ГАМКергических клеток коры головного мозга человека.
Boldog E. et al. Transcriptomic and morphophysiological evidence for a specialized human cortical GABAergic cell type. Nature neuroscience, 21, 2018. doi: 10.1038/s41593-018-0205-2

10. Не принцип процесса клеточного слияния в общем, но зависимая от ниши трансформация эндотелиальных клеток-предшественников в процессе образования клеток миокарда.
Murasawa S. et al. Niche-dependent translineage commitment of endothelial progenitor cells, not cell fusion in general, into myocardial lineage cells. Arteriosclerosis, thrombosis, and vascular biology, 25, 2005. doi: 10.1161/01.ATV.0000168409.69960.e9